流式細胞周期檢測服務(wù)

流式細胞周期檢測服務(wù)細胞周期檢測的原理：

　　PI法是經(jīng)典的周期檢測方法。PI為插入性核酸熒光染料，能選擇性的嵌入核酸DNA和RNA雙鏈螺旋的堿基之間與之結合，其結合的量與DNA的含量成正比例關(guān)系，用流式細胞儀進(jìn)行分析，就可以得到細胞周期各個(gè)階段的DNA分布狀態(tài)，從而計算出各個(gè)期的百分含量。PI染色后，假設G0/G1期細胞的熒光強度為1，那么含有雙份基因組DNA的G2/M期細胞的熒光強度的理論值為2，正在進(jìn)行DNA復制的S期細胞的熒光強度為1-2之間。

　　細胞周期內有兩個(gè)階段為重要：G1到S和G2到M；這兩個(gè)階段正處在復雜活躍的分子水平變化的時(shí)期，容易受環(huán)境條件的影響，如果能夠人為地進(jìn)行調控，將對深入了解生物的生長(cháng)發(fā)育和控制腫瘤生長(cháng)等有重要意義。能夠方便有效地檢測細胞周期的變化，對于藥物研發(fā)和疾病研究等都具有重要的意義。單個(gè)細胞的周期測定可采用縮時(shí)攝影的方法，但它不能代表細胞群體的周期，故現多采用其他方法測群體周期。

　　流式細胞周期檢測服務(wù)測定細胞周期的方法很多，有同位素標記法、流式細胞儀法、基于細胞成像的熒光檢測法等。流式細胞儀PI染色法檢測細胞周期的原理：由于細胞周期各時(shí)相的DNA含量不同,通常正常細胞的G1/G0期具有二倍體細胞的DNA含量(2N),而G2/M期具有四倍體細胞的DNA含量(4N),而S期的DNA含量介于二倍體和四倍體之間。

　　PI可以與DNA結合，其熒光強度直接反映了細胞內DNA含量。因此,通過(guò)流式細胞儀PI染色法對細胞內DNA含量進(jìn)行檢測時(shí),可以將細胞周期各時(shí)相區分為G1/G0期,S期和G2/M期,獲得的流式直方圖對應的各細胞周期可通過(guò)特殊軟件計算各時(shí)相的細胞百分率。

　　流式細胞術(shù)(flowcytometry,FCM)是一項新型的、發(fā)展迅速的生物醫學(xué)分析技術(shù),它是集激光技術(shù)、光電測量技術(shù)、計算機技術(shù)、流體力學(xué)以及細胞免疫熒光化學(xué)技術(shù)、單克隆抗體技術(shù)為一體的新型高科技細胞分析技術(shù)。流式細胞儀是應用Chemicalbook流式細胞術(shù)建立起來(lái)的儀器裝置。它使細胞或微粒在液流中流動(dòng),逐個(gè)通過(guò)一入射光束,并用高靈敏度檢測器記錄下散射光及各種熒光信號,從而得以對粒子進(jìn)行多參數分析,包括諸如粒子形狀和大小、細胞周期、細胞內細胞因子、細菌表面抗原、細胞DNA內含物等。

　　細胞凋亡或稱(chēng)程序性細胞死亡（Programmed Cell Death ,PCD）是細胞的生命現象之一，它在機體的胚胎發(fā)育、組織修復及自身反應性T淋巴細胞的清除等方面起著(zhù)十分重要的作用。細胞凋亡調節的失控可導致臨床各種疾病的發(fā)生。如老年性癡呆與神經(jīng)細胞凋亡過(guò)度有關(guān)，自身免疫性疾病和腫瘤與細胞凋亡的抑制有關(guān)。細胞凋亡有別于細胞壞死，它有一系列的細胞形態(tài)學(xué)和生物化學(xué)的改變，包括出現染色質(zhì)濃縮、DNA降解、凋亡小體形成等。在正常的活細胞，磷脂酰絲氨酸（phosphotidylserine， PS）位于細胞膜的內側，但在凋亡的細胞，PS 從細胞膜的內側翻轉到細胞膜的表面，暴露在細胞外環(huán)境中。Annexin-Ⅴ（膜聯(lián)蛋白-V）是一種分子量為35-36KD的Ca2+ 依賴(lài)性磷脂結合蛋白，能與PS高親和力結合。因此將Annexin-Ⅴ進(jìn)行熒光素（如FITC、PE）或生物素（Biotin）標記，以標記了的Annexin-Ⅴ作為探針，利用流式細胞儀或熒光顯微鏡可檢測細胞凋亡的發(fā)生。

　　小鼠腹腔注射地塞米松25 mg/kg體重，10 h后解剖取胸腺，分離胸腺細胞。用PBS洗兩遍，調整待測細胞的濃度為2×106 /ml，備用。

　　2.  200 μl細胞懸液加入1 ml冷PBS，輕輕震蕩使細胞懸浮，1000 rpm 4 ℃離心10 分鐘，棄上清。

　　3.  重復步驟2兩次。

　　4.  將細胞重懸于200 μl 標記緩沖液。

       1.整個(gè)操作過(guò)程動(dòng)作要盡量輕柔，切勿用力吹打細胞，盡量在4 ℃下操作。

　　2.  反應完畢后要盡快檢測，因為細胞凋亡是一個(gè)動(dòng)態(tài)的過(guò)程，反應一小時(shí)后熒光強度就開(kāi)始衰變。

　　3.  Annexin V-FITC是光敏物質(zhì)，在操作時(shí)要注意避光。

送樣運輸要求：

需要活細胞(只接武漢本地樣本，外地樣本不接)。如果細胞帶熒光，一定要在交接單和培養板上備注，否則按照無(wú)熒光處理，如果因此導致檢測結果不可用及樣本浪費，我方概不負責，也不接受退單。

毓秀生物科技（上海）有限公司是一家專(zhuān)注于生物科技前沿技術(shù)研發(fā)和科研技術(shù)服務(wù)的公司，公司建有專(zhuān)業(yè)的分子生物學(xué)、細胞生物學(xué)、組織病理學(xué)實(shí)驗室，為眾多生物醫藥企業(yè)、科研機構、醫院及高校提供分子生物學(xué)、細胞生物學(xué)、病理形態(tài)學(xué)等方面科研服務(wù)。公司核心團隊曾在國內外許多優(yōu)秀學(xué)府從事過(guò)多年研發(fā)工作，秉承“為客戶(hù)創(chuàng )造價(jià)值，為員工實(shí)現夢(mèng)想，為社會(huì )創(chuàng )造財富"的經(jīng)營(yíng)理念，堅持以技術(shù)創(chuàng )新為先導，以服務(wù)質(zhì)量為根本，為中國生物醫藥和科學(xué)研究提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)。